您好!欢迎登录北京酷来搏科技有限公司官方网站!

  • 首页
  • 万博哪里下载分类
  • 定制万博哪里下载
  • 试用体验
  • 新闻动态
  • 促销活动
  • 关于我们
  • 联系我们
  • 万博哪里下载分类
    当前位置:首页 > 新闻动态
    三种显色方法ECL、NBT/BCIP和DAB的对比
    日期:2019/12/30 访问:


    在免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)和蛋白印迹(WB)等生化实验中,ECL、NBT/BCIP和DAB都是非常常用的显色方法。而这三者有什么区别呢?下面我们就来对比一下。

    ECL

    增强化学发光,一般含有鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化,产生荧光,这个过程被发光增强剂加强。其中,增强剂在体系中扮演着核心角色,决定着ECL化学发光的发展。

    理想的发光增强剂是:(1)发光灵敏,目前一般的发光增强剂都可以将发光灵敏度提高1000倍至100000倍以上;(2)发光稳定,这是目前研究的重点之一,发光不稳定的增强剂,容易在一些情况下发生“淬灭”,不容易被检测到;(3)本底或背景低,这也是发展的方向之一,欲得到准确可靠的结果,就必须确保试剂的特异性,在无HRP或很少HRP的情况下,不发光或很少发光。

    相关万博哪里下载:ECL超敏发光液(Cat:SL1350)——酷来搏品牌

    66.png

    NBT/BCIP

    NBT+BCIP是碱性磷酸酶最佳的底物组合之一。在碱性磷酸酶(AP)的催化下,BCIP会被水解而产生强反应性产物,该产物与NBT发生反应,形成不溶性的深蓝色至蓝紫色化学物。该试剂盒可用于碱性磷酸酶系统的IHC和WB实验的酶促显色。在AP的催化下,在组织切片或印迹膜上结合了AP偶联物的地方产生深蓝色沉淀,可根据颜色反应来确定目的蛋白的位置及表达情况。

    相关万博哪里下载:BCIP/NBT显色试剂盒(Cat:SK2030)——酷来搏品牌

    66.png

    DAB

    二氨基联苯胺(3,3’-diaminobenzidine,DAB)是过氧化物酶的显色底物,在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累,形成棕褐色不溶性产物,并就地原位沉淀。显色反应原理如下:

    HRP+H2O2+DAB→HRP+H2O+氧化型DAB↓

    该方法特异性好,性能稳定,操作便捷,适用于蛋白质杂交和免疫化学,其终产物可直接在普通环境下观察,但灵敏度是这三种方法中最低的,仅能达到500pg。

    相关万博哪里下载:DAB显色试剂盒(20×)(Cat:SK2020)——酷来搏品牌
    66.png


                            表1. ECL、NBT/BCIP和DAB对应的酶及显色反应

    11.png


    综上所述,ECL和DAB都是HRP的底物,NBT/BCIP的酶是碱性磷酸酶。而且三者的颜色显示不同,DAB的显色是棕褐色,NBT/BCIP显蓝色,ECL显荧光。在灵敏度方面,ECL化学发光的灵敏度最高,为1~5pg,也有达到fg级的,BCIP/NBT的灵敏度100pg,DAB的灵敏度最低,大约为500pg。在试验中进行选择时,可根据不同的酶以及灵敏度等进行选择,并且注意操作时应佩戴手套,避免将显色剂与皮肤接触,用后及时彻底冲洗。

     
     
     
     
  • 配送指南

  • 送货上门
  • 快递发货
  • 客户自提
  • 收货说明
  • 支付方式

  • 付款方式
  • 发票说明
  • 逾期说明
  • 预付货款
  • 售后服务

  • 免责声明
  • 技术说明
  • 退换货说明
  • 常见问题
  • 京ICP备13050818号-1