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    中文名:酵母转化试剂盒(酿酒酵母专用)

    英文名:Yeast Transformation Kit

    CAS:N/A

    级别:N/A

    分子量:N/A

    分子式:N/A

    纯度:N/A

    储存条件:RT

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    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
    200T
    698
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    万博哪里下载简介

    酵母感受态细胞的制备:

        1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA新万博manbetx下载app(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。

        2.挑取酵母单菌落在固体YPDA新万博manbetx下载app上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。

        3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA新万博manbetx下载app中,30℃过夜培养。

        4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA新万博manbetx下载app的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。

        5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。

        6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮(30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮,通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。

        7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中,每管分装100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。

    酵母转化:

        1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。

    50% PEG

    240 μl

    1 M LiAc

    36 μl

    Carrier DNA(10 mg/ml)

    5 μl

    质粒(大约200 ng/μl)

    5 μl(根据质粒的浓度加入相应的体积)

    总体积

    360 μl


        2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。

        3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min,每10 min混匀一次。

        4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min,每10 min混匀一次。

        5.12000 rpm,离心1 min,去掉上清液。

        6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水,悬浮沉淀。

        7.把酵母细胞涂到相应的酵母新万博manbetx下载app平板上,30℃培养2-4天。

    注意事项:

        1. 初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。

        2. PEG溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。

        3. 转化全程要无菌操作。


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