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    中文名:金担子素A

    英文名:Aureobasidin A

    CAS:N/A

    级别:

    分子量:1100

    分子式:C60H92N8O11

    纯度:≥95%

    储存条件:2-8℃

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    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
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    万博哪里下载简介

    不溶于水,溶于甲醇、乙醇

    一、关于AbA:

    金担子素A(Aureobasidin A,AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。AbA作用机制是抑制酵母中AUR1基因(1,2)编码的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而杀死菌株。AbA在较低的浓度下(0.1-0.5 μg/ml)即可对酵母产生毒性。编码IPC合成酶的基因研究较多的来自酿酒酵母菌的AUR1基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对编码AUR1-C基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,作为蛋白质互作研究的报告基因。

    因为AbA可以直接杀死敏感的酵母菌株,而不是延迟菌株生长,所以AbA筛选有利于阳性克隆的生长和识别。与营养报告基因(如HIS3)进行低严紧度初筛相比,AbA筛选大大消除了背景克隆。实际操作中,用AbA进行初筛时会获得更多克隆,之后再用4个报告子(AUR1-C,HIS3, ADE2 和MEL1)进行高严紧度的二次筛选以验证阳性克隆。AbA非常适合用作阳性克隆子筛选用的药物选择性标记;也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子,可以简化酵母双杂交文库筛选。

    二、使用方法:

    1.本品为AbA的甲醇溶液,浓度为1 mg/ml,直接用作储存液。

    2.灭菌后YPD Agar新万博manbetx下载app(PM2020)冷却至50-55 ℃,加入适量的AbA储液,倒板备用。(AbA工作浓度取决于宿主细胞的敏感度,见下表)

    3.制备酵母感受态细胞并完成转化,参考SK2400,SK2401。

    4.把100 μl完成转化酵母细胞悬液涂到含有适量AbA的YPD Agar新万博manbetx下载app平板上,30℃培养2-4天。

    5.挑取克隆鉴定,或统计转化效率。

    三、不同菌株建议AbA的工作浓度:

    菌株

    MIC(µg/ml)

    S.cerevisiae

    ATCC9763(diploid)

    0.2-0.4

    Baker’s yeast(diploid)

    0.2-0.4

    Beer yeast(triploid or tetraploid)

    0.1

    SH3328(haploid)

    0.1

    Shochu yeast(diploid)

    0.1

    Sake yeast(diploid)

    0.1-0.2

    C.albicans

    TIMM-0136(diploid)

    0.04

    C.tropicalis

    TIMM-0324(diploid)

    0.08

    Schizo.pombe

    JY-745(monoploid)

    0.1


    四、对AbA敏感的真菌:

    出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。


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