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    中文名:酵母阳性克隆检测试剂盒(杂交筛库)

    英文名:Positive clone assay

    CAS:N/A

    级别:N/A

    分子量:N/A

    分子式:N/A

    纯度:N/A

    储存条件:2-8℃

    说明书下载点击下载 >>

    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
    20T
    198
    198
    200T
    898
    898
    50T
    298
    298
    万博哪里下载简介

    保存条件:-20 ℃储存,未开封有效期24个月。

    包装内容:

    11.png

    万博哪里下载说明:

    本万博哪里下载用于酵母单杂双杂筛库系统,可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。

    PCR Mix含Taq、dNTP、PCR buffer和水,只需要补充模板5 μL,引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。本试剂盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外(可供200 T),还免费提供菌液裂解液II用于菌液PCR(可供20 T)。

    使用方法:

    菌落样品

    1.准备PCR预混液:根据检测克隆数,等比例扩大配制体积。

    11.png

    2.吸取5 μL菌落裂解液I加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

    3.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1-2 mm的酵母菌落悬浮在菌落裂解液I中。

    4.吹打或者震荡混匀后,静置5 min,即为裂解产物。

    5.(可选步骤)于-20 ℃冷冻5 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s。

    6.在裂解产物中加入45 μL PCR预混液(已加引物),直接PCR扩增。

    注意:

    1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。

    2. 培养时间短的样品,无需冷冻。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液,解冻与否均可。

    3. 团状酵母菌落很难裂解,吹打或者震荡混匀尤为重要。

    菌液样品

    1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

    2. 再加入等体积的酵母菌液,震荡混匀。

    3. 于-20 ℃冷冻3 min或置于-80 ℃冰箱速冻10 s后,PCR仪95 ℃保温2 min。

    4. 12,000 rmp离心2 min,取裂解产物(上清),用于PCR扩增。

    PCR反应体系:

    11.png

    PCR反应条件:

    11.png

    注意事项:

    1. 菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。

    2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。

    3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后,用快速酵母质粒提取试剂盒(PE052)提取(约需30 min),再进行PCR扩增。

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