您好!欢迎登录北京酷来搏科技有限公司官方网站!

  • 首页
  • 万博哪里下载分类
  • 定制万博哪里下载
  • 试用体验
  • 新闻动态
  • 促销活动
  • 关于我们
  • 联系我们
  • 万博哪里下载分类

    中文名:Super酵母转化试剂盒II(酿酒酵母专用)

    英文名:Super Yeast Transformation Kit II

    CAS:N/A

    级别:N/A

    分子量:N/A

    分子式:N/A

    纯度:N/A

    储存条件:2-8℃

    说明书下载点击下载 >>

    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
    200T
    1598
    1598
    万博哪里下载简介

    储存条件:-20 ℃保存,未开封有效期24个月。Y3避免多次冻融;Y1、Y2溶液可2-8 ℃保存。

    万博哪里下载内容:

    11.png

    万博哪里下载说明:

      Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒(SK2401)可以完成酿酒酵母感受态制备,感受态冻存,转化实验。最突出的优点可一次性制备200支感受态,-80 ℃冰箱可冻存一年,后续酵母转化实验无需重新制备感受态,操作简单快速,该试剂盒的转化效率与经典酵母转化试剂盒(SK2400)基本相同。如需进一步提高酵母转化效率,可选用Coolaber的Super酵母感受态制备与转化试剂盒Plus(SK2402)或单独购买YPD Plus Liquid Medium(YT0004),转化产物用YPD Plus复苏,其转化效率可以提高50-100%。

    使用方法:

    感受态细胞的制备:(按小体积转化制备20支感受态计,可按比例扩大)

    1.活化菌种。-80 ℃保存的菌种在YPDA新万博manbetx下载app平板上划线,30 ℃培养2-4天。

    2.挑取酵母单菌落在YPDA新万博manbetx下载app平板上划3-5 mm的短线,30 ℃培养2-4天。

    3.待酵母单菌落直径长至2 mm时,把酵母细胞接种到3 mL液体YPDA新万博manbetx下载app中,30 ℃过夜培养。

    4.第二天转接到含有50 mL液体YPDA新万博manbetx下载app的三角瓶中继续培养,待OD600达到0.4-0.5,3000 rpm离心5 min,弃上清。(4 ℃保存1周内的酵母菌液,用3 mL接种50 mL YPDA新万博manbetx下载app过夜培养)

    5.用10 mL Y1溶液重悬沉淀,3000 rpm离心5 min,弃上清。

    6.加入1 mL Y2溶液重悬,按50 μL分装于1.5 mL无菌冻存管,转文库按600 μL分装,感受态细胞即制备完毕,可直接用于转化。

    7. 制备好的感受态细胞需缓慢冷冻后,再置于-80 ℃冰箱长期保存。将感受态细胞放入程序降温盒,或用

    多层纸包裹放入泡沫盒中,先置于-80 ℃冰箱过夜后,再取出感受态置于-80 ℃冰箱,可保存一年。使用前室温融化后用于转化。

    转化预混液配制:

    11.png

    酵母质粒转化:

    1.吸取360 μL预混液加入50 μL感受态细胞中,反复吹吸沉淀,使酵母细胞完全悬浮于预混液中。

    2.30 ℃的水浴锅中热激60 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

    3.12,000 rpm离心15 s,弃上清。

    4.(可选步骤)用1 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养30-60 min。12000 rpm离心15 s,弃上清。

    5.加入400 μL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选新万博manbetx下载app平板,30 ℃培养2-4天。

    酵母文库转化:(需用15-50 mL离心管)

    1.将2450 μL预混液加入到600 μL感受态细胞中,震荡使感受态细胞充分悬浮于预混液中。

    2.30 ℃的水浴锅中热激90 min,每10 min混匀一次。对于部分菌种,延长孵育时间可提高转化效率,但不要超过3小时。

    3.3000 rpm离心5 min,弃上清。

    4.(可选步骤)用3 mL YPD Plus Liquid Medium重悬沉淀,30 ℃摇床震荡培养90 min,3000 rpm离心5 min,弃上清。

    5.加入15 mL无菌去离子水或0.9%氯化钠溶液重悬菌体,涂筛选新万博manbetx下载app平板,30 ℃培养2-4天。

    注意事项:

    1. 转化全程要求无菌操作。

    2. 为了保证转化效率,务必缓慢冻存感受态,感受态不宜直接用液氮冻存。

    3. 增加酵母质粒的纯度和浓度可以提高转化效率。


    发表文章:

    Chai, Mengzhu, et al. "P3N-PIPO interacts with P3 via the shared N-terminal domain to recruit viral replication vesicles for cell-to-cell movement." Journal of Virology 94.8 (2020).(IF=4.501)

    https://doi.org/10.1128/JVI.01898-19


    我的购物车 (0)
  • 配送指南

  • 送货上门
  • 快递发货
  • 客户自提
  • 收货说明
  • 支付方式

  • 付款方式
  • 发票说明
  • 逾期说明
  • 预付货款
  • 售后服务

  • 免责声明
  • 技术说明
  • 退换货说明
  • 常见问题
  • 京ICP备13050818号-1