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    中文名:X-gal储存液(20mg/ml)

    英文名:X-gal Solution

    CAS:N/A

    级别:N/A

    分子量:N/A

    分子式:N/A

    纯度:N/A

    储存条件:-20°C

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    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
    5ml
    140
    140
    万博哪里下载简介

    中文别名:5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷

    英文别名:5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactopyranoside; 5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside

    物理性质:白色至浅黄色粉末,溶于DMSO,溶解度可达20mg/mL。也溶于DMF。

    万博哪里下载用途:

    X-Gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的显色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下会产生蓝色产物。基于这个特点,当pUC系列载体DNA以lacZ 缺欠细胞作为宿主进行转化时,或M13噬菌体载体DNA进行转染时,如果在新万博manbetx下载app中加入X-Gal和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互补性,可以根据是否呈现白色而方便地挑选择出基因重组体。

    常用于β-半乳糖苷酶的原位染色检测以及蓝白斑筛选。

    配制储存液

    称取200 mg X-Gal于15 mL 离心管,向其中加入10 mL DMF,旋涡震荡使其充分溶解后于-20℃避光保存,正确操作下,有效期可达5-12个月,如小量频繁使用,建议分装成1 mL/管后避光冻存。

    蓝白斑筛选

    1. X-Gal、IPTG 加入琼脂新万博manbetx下载app溶液

    1)高压灭菌已加琼脂的新万博manbetx下载app,并冷却到50℃左右。

    2)每毫升新万博manbetx下载app内加入10 μL 20 mg/mL X-gal溶液、10 μL 0.1 M的IPTG(使其终浓度达到1 mM);

    3)加入适量抗生素;

    4)混匀后按照平板大小倒入适量新万博manbetx下载app,待新万博manbetx下载app冷却至室温后,接种细菌于37℃过夜培养。

    2. X-Gal、IPTG加到琼脂平板表面

    1)于无菌超净工作台制备平板(如LB 琼脂板);

    2)取40 μL 100 mM IPTG和120 μL 20 mg/mL X-gal混合,均匀地涂布于准备好的平板上;

    注:平板边缘较难充分涂布均匀,容易产生假阳性,因此,为了得到更好结果,建议后续操作中尽可能在平板中间挑取单克隆。

    3)37℃孵育直至所有液体被吸收(30 min或更长)。接种细菌于37℃过夜培养。

    做酵母菌EGY48,使用方法参考10×BU溶液(pH 7.0,过滤除菌)(货号SL0960);做酵母菌YM4271,使用方法参考 Z buffer(货号SL0950)。



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