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万博哪里下载分类

中文名:15%尿素-PAGE制胶液(DNA,microRNA)

英文名:15% Urea-PAGE Gel solution

CAS:N/A

级别:N/A

分子量:N/A

分子式:N/A

纯度:N/A

储存条件:RT

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万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
SL2300-500ml500ml480480
万博哪里下载简介

成分终浓度用量
尿素7M42g
40% Acr/Bis Solution15%37.5ml
10×TBE 电泳液10ml
补RNase-free水到100ml

过滤后避光保存

注:Acr/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)

6-100 nt20%
25-150 nt15%
40-200 nt12%
60-400 nt8%
80-500 nt5%
1000-2000 nt3.50%

1. 边摇晃溶液变加入TEMED 和10%过硫酸铵。

2. 再充分摇晃约 30 秒后迅速灌胶,然后插入样品梳,室温放置 30-60 分钟 等待胶凝固。 3. 将凝胶板放置在电泳装置上后,在上下层分别加入适当量的 1×TBE电泳缓冲液。如果不马上使用,需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。 

4. 拔出梳子后用加样枪吸取电泳缓冲液,充分将每个加样空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和气泡吹打出来。

5. 在上样前,预电泳 20-30 分钟以使多余的过硫酸铵跑出加样空,同时还可 以使凝胶的温度升高(到 50℃左右),有利于 RNA 变性状态。 

6. 将 miRNA 样品与等体积的 miRNAon 混合,70℃保温 2-3 分钟后迅速放 置在冰上冷却,快速离心半分钟,放冰上待用。miRNA Marker 需要每个 上样孔用 5uL,一块胶最好在两侧各用一个孔上样 miRNA Marker。 

7. 关电泳仪后开始上样。 

8. 重开电泳仪,对 13 cm×15 cm 的胶,以 20-30mA 的电流电泳,直到红 色染料移动到凝胶边缘为止;对 36 cm×45 cm 的胶,则以 50-60mA 的 电流电泳,直到红色染料移动到凝胶边缘为止。 

9. 染色观察:将凝胶一面的玻璃板揭开,直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行各种染色,包括银染(固定、漂洗、显影和定影等步骤)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)。UV 下观察并拍照。 

10. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后进行胶回收处理。 

11. Northern 杂交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下确定所需要的 miRNA 条带的位置,切胶后电转移到带正电的尼龙膜上,然后进行杂交处理。 

12. 放射自显影:如果 miRNA 样品电泳前经过同位素标记,则将凝胶一面的 玻璃板揭开,用滤纸将附着在另一玻璃板上的凝胶吸附过来,然后包上保 鲜膜,真空抽干,然后使胶跟 X 光片向对置进行放射自显影。



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