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    中文名:酵母阳性克隆检测试剂盒(杂交筛库)

    英文名:Positive clone assay

    CAS:N/A

    级别:N/A

    分子量:N/A

    分子式:N/A

    纯度:N/A

    储存条件:2-8℃

    说明书下载点击下载 >>

    万博哪里下载编号 规格 目录价(¥) 优惠价(¥) 数量 操作
    20T
    198
    198
    200T
    698
    698
    万博哪里下载简介

    保存条件:-20℃储存,有效期1年。

    包装内容:

    11.png


    万博哪里下载说明:

    本万博哪里下载用于酵母单杂双杂筛库系统,可以快速地扩增、分选并分析文库筛选所获得的阳性克隆中prey/文库质粒的cDNA插入片段。

    PCR Mix 含Taq、dNTP、PCR buffer和水,只需要补充模板5μL,引物混合物1 μL即可用于PCR扩增。可供50 μL PCR体系进行200次扩增实验。

    3AD & 5AD引物混合物可用于pGADT7、pGADT7-Rec、pGADT7-Rec2系列载体构建的AD文库。每50 μL体系加入1 μL引物混合物。亦可根据需要加入自备引物。

    本试剂盒除提供菌落裂解液I用于平板菌落PCR外(可供200T),还免费提供菌液裂解液II用于菌液PCR(可供20T)。

    使用方法:

    菌落样品

    1.吸取5 μL的菌落裂解液I加入到PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

    2.用无菌牙签或者枪头刮取适量直径1~2 mm的酵母菌落悬浮在装有菌落裂解液I的PCR管中。

    3.搅拌(吹打)或者震荡混匀后,静置5 min,即为裂解产物。

    4.(可选步骤:于-20℃冷冻 5 min 或置于-80℃冰箱速冻10 s。)

    5.准备PCR预混液:

    11.png

    6.在5 μL的裂解产物中加入45 μL PCR预混液(已加引物),直接进行PCR扩增。

    注意:1. 先取3-5个克隆进行预实验后再进行批量实验。

          2. 培养时间短的样品,无需冷冻处理。冷冻完的样品可直接加入PCR预混液,解冻与否均可。

          3. 团状酵母菌落很难裂解,搅拌或者震荡混匀尤为重要。 

    菌液样品

    1. 吸取5-10 μL菌液裂解液II加入PCR管中(如处理样品量大,建议用8联排PCR管)。

    2. 在含有菌液裂解液II的PCR管中加入等体积的酵母菌液。

    3. 搅拌或者震荡混匀。

    4. 冷冻处理:于-20℃冷冻3 min 或置于-80℃冰箱速冻10 s后,PCR仪95℃保温2 min。

    5. 12,000 rmp离心2 min,取上清裂解产物,用于PCR扩增。

    PCR反应体系:

    11.png

    PCR反应条件:

    11.png

    注意事项:

    1. 菌落PCR前,先刮取部分菌落保存,可以有效避免样品污染和丢失。

    2. 新鲜菌落的PCR成功率接近100%。如生长期较长的菌落,请先进行预实验。

    3. 如部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议小摇之后,用酵母质粒快速提取试剂盒II型(PE052)提取(约需30 min)后再进行PCR扩增。


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